Всего за 69.9 руб. Купить полную версию
Рис. 4. Аспирация кишечного содержимого
Таким образом, разработанный способ интраоперационного забора материала для бактериологического анализа содержимого тонкой кишки позволяет выполнить "золотой стандарт" диагностики СИБР, при этом анализу подвергаются оба пула внутрикишечных микроорганизмов, а именно, просветная и мукозная флора.
К непрямым методам относятся тесты, основанные на изучении метаболитов микрофлоры (Воробьев А. А., 2004; Чернин В. В., 2008, Gasbarrini A., 2007, Khoshini R., 2008, Mendoza E., 2007, Rana S. V., 2008, Stotzer P. O., 2000):
a) молекулярно-генетические методы исследования микроорганизмов;
b) гистохимические;
c) морфологические;
d) комбинированные методы исследования биоматериала;
e) биохимические;
f) различные дыхательные тесты.
Молекулярно-генетический метод. Метод дает возможность получить информацию о видовом составе микробиоты кишечника. Метод основан на достраивании исследуемой ДНК или РНК микроба с помощью фермента термостабильной ДНКполимеразы (Ардатская М. Д., 2001). Метод применяется для контроля бактериальных групп и отдельных видов бактерий (до 18 штаммов). Отличается ПЦР-диагностика быстротой выполнения, видовой специфичностью, чувствительностью. Однако метод трудоемок, является дорогостоящим исследованием, требует индивидуального подбора олигонуклеотидов для каждой реакции, что ограничивает его широкое применение в практике.
Хромато-масс-спектрометрия. Этот метод основан на фиксации элюата, выделяющегося из хроматографической колонки. При этом хроматографическое разделение может быть проведено различными методами хроматографии. Методы позволяют определить родовой состав микрофлоры 35–40 возбудителей (Осипов Г. А., 1995), получить уникальную информацию о составе компонентов микробной клетки.
Хромато-спектрометрия является специфичной для диагностики анаэробных микроорганизмов. Метод позволяет оценить жизнеспособность микроорганизмов (Ардатская М. Д., 2000, 2001, 2006, 2009; Парфенов А. И., 2007). При помощи метода возможно определение малых концентраций клеток микроорганизмов. Так же достоинством метода является быстрота получения результатов. Однако для определения широкого спектра возбудителей необходимо проводить неоднократные исследования, что является недостатком метода. К прочим недостаткам можно отнести высокую стоимость исследования, необходимость использовать дорогостоящее оборудование, обучать методике медицинский персонал, в связи с чем метод не получил широкого применения.
Исследование короткоцепочечных жирных кислот. Метод основан на определении количественного и качественного состава короткоцепочечных жирных кислот (КЖК) фракции С2-С4, являющимися продуктами метаболизма микрофлоры кишечника, (к короткоцепочечным жирным кислотам (фракции С2-С4) относят уксусную, пропионовую, масляную кислоты) в кале и сыворотке крови (Ардатская М. Д., 2000, 2001, 2006, 2009; Плотникова Е. Ю., 2013). Анализ образцов проводится методом газожидкостного хроматографического анализа. Исследование КЖК позволяет подбирать индивидуальную терапию больному, оценивать ее эффективность, уточнить наличие ряда заболеваний ЖКТ (Ардатская М. Д., 2000, 2001, 2006, 2009). Метод позволяет использовать его в качестве скриннигового. Он обладает большой чувствительностью и специфичностью, воспроизводимостью результатов по сравнению с рутинным бактериологическим методом, обеспечивает высокую точность в оценке аэробных и анаэробных популяций микроорганизмов с указанием их родовой принадлежности. Недостатками метода являются необходимость обучения медперсонала, высокая стоимость, неудобство для обследуемых людей в транспортировке материала для исследования. Все это не позволяет методу получить более широкое распространение.
Методы, основанные на изучении концентрации индикана, продуцируемого индол-положительными микроорганизмами, фенола и паракрезола, являющихся метаболитами аэробных (в меньшей степени) и анаэробных (в большей степени) микроорганизмов (Ардатская М. Д., 2011; Плотникова Е. Ю., 2013), к сожалению, не получили должного распространения в клинической практике.
Известно, что под действием ферментов микроорганизмов незаменимая аминокислота триптофан превращается в индол, который в печени преобразуется в индикан и выделяется с мочой. Отсутствие индикана в моче безмикробных животных, а также снижение его количества при лечении антибиотиками свидетельствует о бактериальном генезе этого соединения. Наиболее высокая экскреция индикана с мочой определяется при диете, содержащей значительное количество мяса и яиц, и наименьшее – при потреблении растительной диеты. Размножающаяся в тонкой кишке флора элиминирует из химуса незаменимую аминокислоту триптофан, снижая всасывание и других аминокислот, вызывая их дефицит в крови, образует большое количество индола, который обладает выраженной гепатотоксичностью (Мартынов В. Л., 2013).
Резко повышенная экскреция индикана позволяет судить о размножении флоры, активно разлагающей триптофан, не только в дистальных, но и в проксимальных отделах кишечника. В норме в суточной моче из организма выделяется не более 100 мг индикана, что не обнаруживается обычными качественными пробами. Реакция бывает положительной только в том случае, если содержание индикана в моче превышает норму. Многие методы, в том числе и качественная реакция мочи на индикан, могут давать вполне удовлетворительные результаты, если дисбиоз достаточно выражен и касается многих групп микроорганизмов (Мартынов В. Л., 2013). Данная проба является скрининг-диагностикой синдрома избыточного бактериального роста в тонкой кишке.
Мы обследовали 185 пациентов с доказанной по результатам ирригоскопии недостаточностью илеоцекального клапана, качественная реакция мочи на индикан оказалась положительной у 173 (95 %) пациентов (Мартынов В. Л., 2006). При этом после хирургической коррекции в сроки более года качественная реакция мочи на индикан определена как положительная в 12 (14 %) из 86 случаев. До и после операции эта реакция определялась у 24 пациентов. У всех 24 до операции качественная реакция мочи на индикан оценена как положительная, после баугинопластики указанная реакция оказалась положительной лишь у 4 пациентов (p< 0,001).
Дыхательные тесты. Микробная флора продуцирует большое количество газов, что и используют для диагностики СИБР. Одним из альтернативных неинвазивных вариантов диагностики СИБР являются различные дыхательные пробы, основанные на измерении концентрации газов (углекислый газ, метан, водород, аммиак), продуцируемых микробиотой, в выдыхаемом воздухе. В норме эти вещества метаболизируются толстой кишкой. Если они появляются в воздухе раньше, чем химус достигнет толстой кишки, то это свидетельствует об избыточном росте тонкокишечной микрофлоры (Мечетина Т. А., 2011).
В 2008 г. был принят Римский консенсус по водородным тестам, в котором изложены рекомендации международных экспертов для клинической практики относительно показаний и методов проведения водородных дыхательных тестов при заболеваниях пищеварительного канала (Gasbarrini A., 2009).
По данным литературы, дыхательные тесты неинвазивны, могут использоваться в качестве экспресс-метода практическим врачом, не требуют специального обучения и не имеют высокой стоимости (Григорьев П. Я., 2000, 2004; Парфенов А. И., 2007; Шептулин А. А., 2008; Gasbarrini A., 2008; Rana S. V., 2008).
Используются дыхательные тесты с С12-холеглицерином, С14– гликохолевой кислотой, Д-ксилозой, глюкозой, лактулозой, С13-меченым углеродом (Григорьев П. Я., 2000, 2004; Парфенов А. И., 2007; Шептулин А. А., 2008; Rana S. V., 2008).
Одним из первых дыхательных тестов, используемых для диагностики СИБР, была проба с С14-гликохолевой кислотой (Rana S. V., 2008). Метод основан на способности бактерий деконъюгировать желчные кислоты до С14С02, который измеряется в выдыхаемом воздухе. Тест имеет низкую специфичность и чувствительность (Rana S. V., 2008), а также высокую стоимость (Cuoco L., 2006), в связи с чем его применение не получило распространения.
К углеродным дыхательным тестам относятся пробы с С12– холеглицерином, С13-меченым углеродом, CD-ксилозой. При этом в выдыхаемом воздухе измеряется углекислый газ, который выделяется бактериями кишечника при метаболизме меченых субстратов (Rana S. V., 2008) (обследуемому дают 1 г С14-меченной ксилозы, которая в норме выделяется почками (Rana S. V., 2008; Simren M., 2006). При наличии СИБР ксилоза метаболизируется до 14С02, который выводится легкими. По данным S. M. Riordan (1995) чувствительность и специфичность его низкие. Проведенные P. O. Stotzer (2000) исследования показывают, что чувствительность теста с D– ксилозой составляет 70 %.
Дыхательные тесты с углеводсодержащими субстратами (лактулоза, глюкоза, ксилоза) основаны на способности кишечных бактерий метаболизировать различные вещества с последующей регистрацией в выдыхаемом воздухе их метаболитов – водорода и / или метана (Кучерявый Ю. А., 2010). В норме все эти вещества должны метаболизироваться толстокишечными бактериями, появление же этих веществ раньше, чем они достигают толстой кишки, является маркёром наличия СИБР. Около 14–20 % H 2 , высвобождаемого в толстой кишке, экскретируется через легкие (Плотникова Е. Ю., 2013; Levitt M. D., 1970). Причем отмечается сильная положительная (линейная) зависимость между концентрацией выделяемого легкими водорода и концентрацией водорода в просвете кишечника. Таким образом, концентрация водорода в выдыхаемом воздухе может быть мерой его кишечной продукции.