В ответ на внедрение ВПГ в серонегативном организме начинается продукция специфических иммуноглобулинов класса М (IgM), которые определяются на 4— б день после инфицирования и достигают максимального значения на 15—20 сутки. С 10—14 дня начинается продукция специфических иммуноглобулинов G (IgG), несколько позднее – IgA. IgM и IgA сохраняются в организме человека недолго (1-2 месяца), IgG – в течение всей жизни (серопозитивность).
Диагностическое значение при первичной герпетической инфекции имеет выявление IgM и (или) четырехкратное увеличение титров специфических IgG в парных сыворотках крови, полученных от больной с интервалом 10—12 дней.
Рецидивирующий герпес обычно протекает на фоне высоких показателей IgG, свидетельствующих о постоянной антигенной стимуляции организма больной. Появление IgM у такой пациентки говорит об обострении болезни.
Для установления ВПГ-инфекции в диагностически сложных случаях необходимо комплексное вирусологическое обследование больных, включающее обнаружение антигена и анализ серологических показателей в динамике. Постановка диагноза герпетического цервицита только на основании серологического исследования может повлечь за собой диагностическую ошибку, так как низкие титры противо- герпетических IgG не всегда доказывают отсутствие активной герпетической инфекции. Выявление же титров IgG выше средних является показанием к дополнительному обследованию пациентки с целью подтверждения или исключения диагноза ВПГ- инфекции (табл. 3).
Таблица 3
Методы идентификации ВПГ
Метод идентификации ВПГ
Чувствительность, %
Специфичность, %
Сроки постановки реакции
на культуре клеток и на животных по ЦПД
80 – 100
100
2 – 7 дней
по антигену:
РИФ (прямой и непрямой метод),
иммуноферментный метод (ИФА),
иммунопероксидазный метод
70 – 75
90
1 – 2 часа
по ДНК:
полимеразно-цепная реакция (ПЦР),
ДНК – гибридизация in vitro и in situ
95
90 – 100
1 – 2 дня
по морфологии инфицированных клеток:
в световом микроскопе
в электронном микроскопе
50 – 80
10 – 80
80
100
1 – 2 часа
по антителам –
специфическим IgG и IgM (метод ИФА)
90 – 95
90 – 95
4 – 6 час
1.5. Mycoplasma genitalium, Ureaplasma urealyticum
Микоплазмы – самые мелкие прокариотические микроорганизмы, не имеющие клеточной стенки (это придает им сходство с L – формами бактерий) и способные к паразитированию на мембранах эукариотических клеток. Способность персистировать на мембранах клеток связана с наличием сходства структуры и состава цитоплазматической мембраны микоплазм с мембранами клеток эукариот и использовании микоплазмами их компонентов (прежде всего холестерина и фосфолипидов) для построения собственных структур. Микоплазмы имеют трехслойную цитоплазматическую мембрану, обеспечивающую целостность микробных клеток и частично замещающую в функциональном отношении отсутствующую клеточную стенку.
Основные характеристики микоплазм: отсутствие истинной клеточной стенки, мелкая кокковидная форма, паразитизм на мембранах эукариотических клеток, рост на плотных средах в виде мелких врастающих в агар колоний с приподнятым центром (“яичница – глазунья”), абсолютная резистентность к пенициллинам и другим действующим на синтез клеточной стенки антибиотикам. Характеризуются малым размером генома, низким содержанием Г+Ц в ДНК. Имеют от 104 до 113 нуклеотидов в 5S рРНК.
M.hominis, M.genitalum, M.fermentans вызывают инфекции, при которых преобладают урогенитальные поражения.
В составе рода Ureaplasma штаммы, выделенные от людей, составляют вид U.urealyticum.
Морфология
Наиболее типичны мелкие кокковидные формы, выражен полиморфизм.
Культуральные и биохимические свойства
Микоплазмы и уреаплазмы прихотливы к условиям культивирования. В составе сред необходимы холестерин и стерины, нативные сыворотки, витамины, соли. Основным источником энергии являются углеводы (особенно глюкоза) или аминокислоты (аргинин). Для усиления восстановительных свойств сред добавляют L- цистеин.Оптимум температуры для культивирования от + 35 до +37С.
Оптимум рН для глюкозоверментирующих микоплазм (M.genitalium, M.fermentans, M.pneumoniae) – около 8,0. Эти микоплазмы ферментируют глюкозу до углекислого газа со сдвигом рН в кислую сторону и изменением цвета среды с зеленого на желто – лимонный.
Колонии уреаплазм (ранее называли Т- микоплазмами (от “tiny -маленький”) значительно меньше колоний классических микоплазм, на средах с добавлением сульфата марганца их колонии окрашиваются в золотисто – коричневый цвет, в отличии от микоплазм уреаплазмы мало чувствительны к небольшим дозам линкомицина (15 мкг/ мл).
Антигенная структура
Микоплазмы характеризуются выраженной гетерогенностью и изменчивостью антигенной структуры (антигенный полиморфизм). Известно 16 серотипов U.urealyticum, разделенных на серогруппы А и В. Степень гомологии серотипов существенно отличается. Часто выделяют от больных смешанные культуры различных серотипов. Выделяют биовары уреаплазм, отличающиеся по вирулентности и строению гена основного фермента – уреазы. Аналогичная динамичность и гетерогенность антигенной структуры и наличие различных сероваров характерна и для различных видов классических микоплазм. По биохимическим и в определенной мере антигенным свойствам среди микоплазм имеются виды – двойники (например, M.pneumoniae и M.genitalium). Среди антигенов выделяют белки – адгезины, фосфо – и гликолипиды, полисахаридные компоненты.
Факторы патогенности
1. Адгезины (обеспечивают взаимодействие с клетками хозяина).
2. Эндотоксины (не тождественны ЛПС грамотрицательных бактерий).
3. Гемолизины.
4. Ферменты – фосфолипаза А, аминопептидазы, протеазы, нейраминидаза.
Патогенез.
Микоплазмы – мембранные паразиты и способны адсорбироваться на различных эукариотических клетках. Этому способствует подвижность патогенных микоплазм, связанная с хемотаксисом и наличием микроворсинок. Микоплазмы способны тесно связываться с мембранами эукариотической клетки, вступать в межмембранное взаимодействие, обмениваться мембранными компонентами (в том числе использовать холестерин и стенолы для построения собственных клеток), оказывать разнообразное влияние на клетки. Коротко остановимся на основных эффектах действия микоплазм на различные клетки.
1. Взаимодействие с фагоцитирующими клетками вызывает цитопатический или цитотоксический эффект и гибель фагоцитов или приводит к длительной персистенции микоплазм в фагосомах фагоцитов.
2. Воздействие микоплазм на макрофаги приводит к нарушению их функций.
3. Персистенция микоплазм на мембранах лимфоидных клеток оказывает существенное влияние на их функции, в том числе непосредственное деструктивное воздействие на иммунокомпетентные клетки (M.fermentans оказывает СПИДо – подобное действие на иммунную систему).
4. Микоплазмы действуют на эритропоэз, т.е. на гомеостаз организма.
5. Обмен антигенными компонентами мембран с клетками хозяина обеспечивает антигенную мимикрию и развитие аутоиммунных реакций.
6. Отсутствие клеточной стенки и частая локализация микоплазм в инвагинатах мембран клеток объясняет их слабую иммуногенность и защиту от действия антител. Этому способствует также высокая антигенная изменчивость молликут.
7. Микоплазмы способны воздействовать на хромосомный аппарат клеток хозяина (на соматические и половые клетки), вызывая хромосомные абберации.