где А среднеарифметическое число конидий в большом квадрате;
Р разведение (10, 100 и т. д).
Определение титра суспензии сухого препарата. Исходя из рекомендуемой нормы применения сухого препарата, например, 1 кг/га при разведении 300 л рабочего раствора, готовят суспензию 3,3 г препарата в 1 л воды в колбе, тщательно перемешивают, фильтруют через 2 слоя марли. Полученную суспензию препарата, аналогичную применяемой в производственных условиях, подвергают анализу. Определение титра препарата проводим как в предыдущем случае.
Контрольные вопросы и задания:
1. С какой целью определяют титр грибных препаратов?
2. Опишите устройство камеры Горяева и работу с ней.
3. Расскажите о порядке работы при разведении препаратов и определении разведения.
4. По какой формуле определяется титр препарата? Что означают члены уравнения?
Лабораторная работа 2. Технология получения и применения биопрепаратов для защиты растений от вредителей
Цель работы: ознакомиться с технологией производства и зарисовать блок-схемы получения бактериальных, грибных и вирусных препаратов, записать технологию их получения и применения.
Материалы и оборудование: образцы микробиологических препаратов, применяемых в защите растений. Насекомые, пораженные грибами, вирусными и бактериальными болезнями. Блок-схемы технологий получения препаратов.
2.1. Получение бактериальных препаратов
Промышленное производство биопрепаратов бактериального происхождения заключается в глубинном культивировании энтомопатогенных бактерий с целью получения максимального титра клеток в культуральной жидкости и накопления токсинов. Промышленные штаммы бактерий должны отвечать следующим требованиям: относиться к определенному серотипу (одному из 12 серотипов и 15 вариантов Δ-эндотоксина Bacillus thuringiensis Berl.), иметь высокую вирулентность и репродуктивность, среднюю чувствительность к комплексу бактериофагов, обеспечивать высокую эффективность биопрепарата. Технология производства всех бактериальных препаратов на основе В. thuringiensis Berl. включает следующие стадии:
1) выращивание посевного материала в лаборатории и посевном аппарате;
2) культивирование в промышленном ферментере;
3) концентрирование культуральной жидкости;
4) сушка, стандартизация и фасовка готового препарата.
Бактерии для создания препарата выращивают сначала в 3-литровых колбах (банках) с искусственной питательной средой (ИПС), а затем в посевном аппарате в условиях аэрации (0,2 л воздуха на 1 л среды в 1 мин).
Посевной материал должен содержать не менее 1,7х109 спор в 1 мл. В посевной аппарат культура добавляется в количестве 0,05 % от объема питательной среды аппарата. Температура культивирования 2830 °С, продолжительность культивирования 3540 ч.
Состав искусственной питательной среды в посевном аппарате и промышленном ферментере следующий: кормовые дрожжи (23 %), кукурузная мука (11,5 %), кашалотовый (рыбий) жир (1 %). При этом культуру доводят до стадии споруляции (образования спор у 9095 % бактериальных клеток) (рис. 2). Если споры не требуются, то среда составляется из глюкозы технической (0,7 %), кукурузного экстракта (4 %), хлорида натрия (2 %). Состав среды влияет на соотношение спор и кристаллов эндотоксина бактерии в культуральной жидкости.
Процесс культивирования заканчивают при степени споруляции 9095 % и титре спор в 1 мг не менее 1х109.
Готовую культуральную жидкость перекачивают в стерильный сборник, передают на сепарацию и получают пасту влажностью 85 % с выходом около 100 кг из 1 м3 культуральной жидкости и титром 20х109 спор в 1 г пасты.
Пасту собирают в отдельном сборнике. Отцентрифугированную питательную среду при необходимости используют еще 12 раза (многократное повторное использование его невозможно, так как в культуральной жидкости накапливаются вещества, тормозящие развитие бактерий). В дальнейшем фугат используют для производства кормовых дрожжей (цикл производства замкнутый, что важно с точки зрения экономичности и охраны окружающей среды).
Пасту направляют на приготовление стабилизированной пасты или сухого смачивающегося порошка конечных препаративных форм биопрепарата.
Рис. 2. Энтомопатогенная бактерия