Приготовление мазков. Тщательно вымытым и обезжиренным предметным стеклом (его краем) прикасаются к капле крови на месте укола. Мазок делают шлифовальным стеклом, поставив его под углом в 45° к предметному стеклу впереди капли. Подведя стекло к этой капле, ждут, пока кровь расплывется вдоль его ребра, затем быстрым легким движением проводят шлифовальное стекло вперед, не отрывая от предметного раньше, чем иссякнет вся капля.
Правильно сделанный мазок имеет желтоватый цвет (тонкий), не достигает краев стекла и заканчивается в виде следа (усов).
Окрашивание сухих мазков производят после предварительной фиксации. Лучшая фиксация достигается в абсолютном метиленовом спирте (35 мин) или в смеси Никифорова из равных частей абсолютного этилового спирта и эфира (30 мин).
К основным гематологическим краскам относят метиленовый синий и его производное азур I (метиленовый азуровый) и азур II (смесь равных частей азура I и метиленового синего), к кислым водорастворимый желтый эозин.
1. Окраска по Романовскому Гимзе. Краска Романовского Гимзе (заводского приготовления) имеет следующий состав: азур II 3 г, водорастворимый желтый эозин 0,8 г, метиловый спирт 250 мл и глицерин 250 мл. Рабочий раствор краски приготавливают из Расчета 1,52 капли готовой краски на 1 мл дистиллированной воды. Краску наливают на мазок возможно более высоким слоем; длительность окраски 3035 мин. По истечении этого срока мазки промывают водой и высушивают на воздухе. При этом способе удается хорошо дифференцировать ядро, но гораздо хуже нейтрофильную зернистость цитоплазмы, поэтому его широко используют для окраски мазка периферической крови.
2. Комбинированная окраска Мая Грюнвальда Романовского Гимзе по Паппенгему. На фиксированный мазок наливают пипеткой готовый краситель фиксатор Мая Грюнвальда, представляющий собой раствор эозинметиленового синего в метиленовом спирте, на 3 мин. Через 3 мин к покрывающей раствор краске добавляют равное количество дистиллированной воды и продолжают окрашивание еще 1 мин. После этого краску смывают и мазок высушивают на воздухе. Затем высушенный мазок докрашивают свежеприготовленным водным раствором краски Романовского в течение 815 мин. Этот метод считается наилучшим, особенно для окраски мазков костномозговых пунктатов (табл. 3).
Таблица 3
Нормальная лейкограмма
Увеличение числа лейкоцитов в периферической крови выше нормального уровня называют лейкоцитозом, уменьшение лейкопенией. Лейкоцитоз (лейкопения) редко характеризуется пропорциональным увеличением (уменьшением) числа лейкоцитов всех видов, например лейкоцитоз при сгущении крови. В большинстве случаев имеется увеличение числа (уменьшение) какого-либо одного типа клеток. Увеличение или уменьшение числа отдельных видов лейкоцитов в крови может быть относительным или абсолютным в зависимости от общего содержания лейкоцитов нормального, повышенного или пониженного. Изменение числа, соотношения отдельных форм и морфологии лейкоцитов зависит от вида и вирулентности возбудителя, характера, течения и распространенности патологического процесса, индивидуальной реакции организма.
Изменения лейкоцитов при патологии
Количественные изменения
Нейтрофилез (нейтрофилия) увеличение содержания нейтрофилов выше 6 × 10
9
Снижение содержания нейтрофилов отмечается при хронических инфекциях, облучении, вирусных заболеваниях, приеме цитостатиков, В
12
Эозинофилия повышение уровня эозинофилов крови выше 0,4 × 10
9
Базофилия увеличение содержания базофилов в периферической крови, наиболее часто встречается при хроническом миелолейкозе и эритремии, а также при хроническом язвенном колите, некоторых кожных поражениях, при аллергических состояниях, заболеваниях системы крови, воспалительных процессах в печени, при длительном облучении малыми дозами радиации, сахарном диабете, в начале месячных у женщин.
Снижение количества базофилов отмечается при применении лучевой терапии, при острых лейкозах.
Моноцитоз увеличение числа моноцитов выше 1,0 × 10
9
Лимфоцитоз увеличение содержания лимфоцитов выше 5 × 10
9
Он может возникать после тяжелого физического труда, в период затихания воспалительных процессов, во время месячных.
Лейкопения уменьшение числа лейкоцитов в крови ниже 4,0 × 10
9
12
Агранулоцитоз резкое уменьшение числа гранулоцитов в периферической крови (менее 0,75 × 10
9
1) миелотоксический агранулоцитоз. Возникает в результате действия цитостатических факторов, зависит от их дозы и экспозиции, развивается обычно постепенно. Число лейкоцитов может падать очень резко, с нейтрофилами уменьшается содержание других лейкоцитов, ретикулоцитов. Миелотоксическому агранулоцитозу свойственно сочетание лейкопении с тромбоцитопенией и анемией, т. е. панцитопения;
2) к иммунным агранулоцитозам относят гаптеновый и аутоиммунный (при системной красной волчанке и некоторых других формах иммунной патологии), а также изоиммунный агранулоцитоз (у новорожденных, иногда после гемотрансфузий). Гаптеновый агранулоцитоз развивается обычно остро, падение числа нейтрофилов в периферической крови может произойти за несколько часов и закончиться полным их исчезновением из циркуляции. Лейкопения носит чаще более умеренный характер, причем гранулоцитопения может быть изолированной при сохранении лимфоцитов, ретикулоцитов и тромбоцитов. В костном мозге наблюдается уменьшение клеточных элементов за счет гранулоцитарного ростка, трепанат нередко оказывается достаточно клеточным.
Продолжительность агранулоцитоза разная: гаптеновый в большинстве случаев заканчивается через 12 недели при условии соответствующей терапии. Выход из агранулоцитоза характеризуется появлением в крови плазматических клеток, молодых гранулоцитов метамиелоцитов и миелоцитов, моноцитов.
Аутоиммунный агранулоцитоз связывают с аутоантителами, обнаруживающимися в крови больных системной красной волчанкой и некоторыми другими заболеваниями и являющимися результатом снижения активности Т-супрессоров.
Изоиммунную нейтропению связывают с отсутствием в костном мозге зрелых гранулоцитов, отмечается иногда у новорожденных, что объясняется выработкой в организме матери антител (изоагглютининов) против лейкоцитов плода, проникновением этих антител через плаценту в кровь ребенка и разрушением гранулоцитов.
Эозинопения (менее 0,05 × 10
9
Лимфоцитопения (менее 1 × 10
9
Снижение числа моноцитов (менее 0,09 × 10
9
Морфологические и биохимические изменения
Токсическая грануляция в нейтрофилах грубая, темно-красного цвета зернистость, содержится в нейтрофилах (сегменто-ядерных, палочкоядерных, метамиелоцитах) при тяжелых инфекциях или токсических состояниях. У здорового взрослого человека часть гранул нейтрофилов не окрашивается по Романовскому Гимзе, но при изменении цитоплазматического окружения, что отмечается при патологии, они становятся окрашенными, как лизосомы.
Тельца Деле овальные или вытянутые образования (включения) светло-голубого или серого цвета в цитоплазме нейтрофильных лейкоцитов, обнаруживаемые при скарлатине, пневмонии, кори, ожогах и представляющие собой участки цитоплазмы, свободные от специфических гранул и богатые РНК.
Гиперсегментация нейтрофильных лейкоцитов наличие более пяти сегментов в ядрах нейтрофилов, может отмечаться у здоровых людей как наследственная конституционная особенность, но также характерна для макрополицитов при дефиците витамина В